【產品名稱】
通用名稱：小反芻獸疫競爭ELISA抗體檢測試劑盒
英文名稱：Competition ELISA test kit for Detecting Peste des Petits Ruminants virus antibodies
【用途】 用于檢測羊血清中的小反芻獸疫抗體。
【規格】 2塊96孔ELISA板。
【儲藏與有效期】 2～8℃保存，有效期9個月。
【試劑盒組成】

名稱	數量
抗原包被板（PPRV）	2塊（96孔）
20×洗滌液	1瓶（30mL/瓶）
PPRV陰性血清	1管（200uL/管）
PPRV陽性血清	1管（200uL/管）
酶標單抗5×	2管（1mL/管）
TMB底物	1瓶（10mL/瓶）
終止液	1瓶（10mL/瓶）
樣品稀釋液	1瓶（14mL/瓶）
說明書	1份

【溶液配制】 洗滌液（1×PBST）：將本試劑盒配備的20×洗滌液用無離子水或超純水作1:20稀釋。
將酶標單抗5×用樣品稀釋液做5倍稀釋配制工作濃度的酶標單抗1×。
【實驗準備】所有試劑使用前恢復至室溫(25℃左右)，加液前充分搖勻。
【操作步驟】
PPRV抗原包被板上陰性血清N、陽性血清P、樣品稀釋液Cm和樣品S的分布如圖所示：

1.加樣：每塊ELISA反應板均需分別設置2孔陰性對照（A1B1）、2孔陽性血清對照（C1D1），2孔稀釋液對照（E1F1），加樣如下：在A1和B1孔內分別加入50uL/孔PPRV陰性對照血清，在C1和D1孔內分別加入50uL/孔PPRV陽性對照血清，在E1和F1孔內分別加入50uL/孔的樣品稀釋液。其他孔為被檢樣品孔，每孔先加入25uL的樣品稀釋液，再分別加入25uL的被檢血清。輕輕震勻后于37℃溫育60分鐘。
2.甩掉包被板孔中的液體，每孔加入約300μL洗滌液1×，洗板4遍，拍干后每孔加入50μL酶標單抗1×，震蕩混勻， 37℃溫育30分鐘。
3.甩掉包被板孔中的液體，每孔加入約300μL洗滌液，洗板4遍，拍干，加入TMB底物，50uL/孔。37℃避光溫育15分鐘。
4.終止讀數：在上述每孔加入50uL終止液后在酶標儀450nm波長處，測定光吸收值。
【結果判定】
1. PPRV陰性血清的平均OD值即OD_NC；PPRV陽性血清的平均OD值即OD_PC；酶標單抗平均OD值即OD_Cm；樣品的OD值即OD_S 。按照以下方法計算抑制率PI
陽性血清抑制率即 PI_PC= [1-OD_PC/OD_Cm)] ×100%
陰性血清抑制率即 PI_NC= [1-OD_NC/OD_Cm)] ×100%
樣品血清抑制率即 PI_S= [1-OD_S/OD_Cm)] ×100%
【判定標準】
1.當PI_PC 大于60%，PI_NC小于40%時試驗成立，否則該次檢測結果無效，否則重新進行試驗。
2.被檢樣品PI_S大于50%時，判為小反芻獸疫抗體陽性；被檢樣品PI_S≤50%時，判為小反芻獸疫抗體陰性。
【注意事項】
1. 所有試劑使用前恢復至室溫(25℃左右)，以免溫度過低影響抗原抗體反應。
2. 實驗前應用溫度計檢查溫箱溫度，溫度過高或過低影響OD值高低。
3. 包被板反應時嚴禁堆疊放置，應該平鋪且板間有空隙，不要離溫箱壁太近。
4. 實驗所用移液器及設備應定期校準。
5. 采集的樣品要新鮮，并且最好不要溶血。血清標本在2～8℃放置不要超過2天，室溫不超過8小時，如需長時間放置應儲存于-20℃。
6. 底物液和終止液對皮膚有刺激性，請帶手套注意個人防護。 
【技術支持】 王金良                                   電話：0543-3403060