小反芻獸疫競爭ELISA抗體檢測試劑盒使用說明書
更新時間:2019-06-19 瀏覽量:
【產品名稱】
通用名稱:小反芻獸疫競爭ELISA抗體檢測試劑盒
英文名稱:Competition ELISA test kit for Detecting Peste des Petits Ruminants virus antibodies
【用途】 用于檢測羊血清中的小反芻獸疫抗體。
【規格】 2塊96孔ELISA板。
【儲藏與有效期】 2~8℃保存,有效期9個月。
【試劑盒組成】
【溶液配制】 洗滌液(1×PBST):將本試劑盒配備的20×洗滌液用無離子水或超純水作1:20稀釋。
將酶標單抗5×用樣品稀釋液做5倍稀釋配制工作濃度的酶標單抗1×。
【實驗準備】所有試劑使用前恢復至室溫(25℃左右),加液前充分搖勻。
【操作步驟】
PPRV抗原包被板上陰性血清N、陽性血清P、樣品稀釋液Cm和樣品S的分布如圖所示:

1.加樣:每塊ELISA反應板均需分別設置2孔陰性對照(A1B1)、2孔陽性血清對照(C1D1),2孔稀釋液對照(E1F1),加樣如下:在A1和B1孔內分別加入50uL/孔PPRV陰性對照血清,在C1和D1孔內分別加入50uL/孔PPRV陽性對照血清,在E1和F1孔內分別加入50uL/孔的樣品稀釋液。其他孔為被檢樣品孔,每孔先加入25uL的樣品稀釋液,再分別加入25uL的被檢血清。輕輕震勻后于37℃溫育60分鐘。
2.甩掉包被板孔中的液體,每孔加入約300μL洗滌液1×,洗板4遍,拍干后每孔加入50μL酶標單抗1×,震蕩混勻, 37℃溫育30分鐘。
3.甩掉包被板孔中的液體,每孔加入約300μL洗滌液,洗板4遍,拍干,加入TMB底物,50uL/孔。37℃避光溫育15分鐘。
4.終止讀數:在上述每孔加入50uL終止液后在酶標儀450nm波長處,測定光吸收值。
【結果判定】
1. PPRV陰性血清的平均OD值即ODNC;PPRV陽性血清的平均OD值即ODPC;酶標單抗平均OD值即ODCm;樣品的OD值即ODS 。按照以下方法計算抑制率PI
陽性血清抑制率即 PIPC= [1-ODPC/ODCm)] ×100%
陰性血清抑制率即 PINC= [1-ODNC/ODCm)] ×100%
樣品血清抑制率即 PIS= [1-ODS/ODCm)] ×100%
【判定標準】
1.當PIPC 大于60%,PINC小于40%時試驗成立,否則該次檢測結果無效,否則重新進行試驗。
2.被檢樣品PIS大于50%時,判為小反芻獸疫抗體陽性;被檢樣品PIS≤50%時,判為小反芻獸疫抗體陰性。
【注意事項】
1. 所有試劑使用前恢復至室溫(25℃左右),以免溫度過低影響抗原抗體反應。
2. 實驗前應用溫度計檢查溫箱溫度,溫度過高或過低影響OD值高低。
3. 包被板反應時嚴禁堆疊放置,應該平鋪且板間有空隙,不要離溫箱壁太近。
4. 實驗所用移液器及設備應定期校準。
5. 采集的樣品要新鮮,并且最好不要溶血。血清標本在2~8℃放置不要超過2天,室溫不超過8小時,如需長時間放置應儲存于-20℃。
6. 底物液和終止液對皮膚有刺激性,請帶手套注意個人防護。
【技術支持】 王金良 電話:0543-3403060
通用名稱:小反芻獸疫競爭ELISA抗體檢測試劑盒
英文名稱:Competition ELISA test kit for Detecting Peste des Petits Ruminants virus antibodies
【用途】 用于檢測羊血清中的小反芻獸疫抗體。
【規格】 2塊96孔ELISA板。
【儲藏與有效期】 2~8℃保存,有效期9個月。
【試劑盒組成】
名稱 | 數量 |
抗原包被板(PPRV) | 2塊(96孔) |
20×洗滌液 | 1瓶(30mL/瓶) |
PPRV陰性血清 | 1管(200uL/管) |
PPRV陽性血清 | 1管(200uL/管) |
酶標單抗5× | 2管(1mL/管) |
TMB底物 | 1瓶(10mL/瓶) |
終止液 | 1瓶(10mL/瓶) |
樣品稀釋液 | 1瓶(14mL/瓶) |
說明書 | 1份 |
將酶標單抗5×用樣品稀釋液做5倍稀釋配制工作濃度的酶標單抗1×。
【實驗準備】所有試劑使用前恢復至室溫(25℃左右),加液前充分搖勻。
【操作步驟】
PPRV抗原包被板上陰性血清N、陽性血清P、樣品稀釋液Cm和樣品S的分布如圖所示:

1.加樣:每塊ELISA反應板均需分別設置2孔陰性對照(A1B1)、2孔陽性血清對照(C1D1),2孔稀釋液對照(E1F1),加樣如下:在A1和B1孔內分別加入50uL/孔PPRV陰性對照血清,在C1和D1孔內分別加入50uL/孔PPRV陽性對照血清,在E1和F1孔內分別加入50uL/孔的樣品稀釋液。其他孔為被檢樣品孔,每孔先加入25uL的樣品稀釋液,再分別加入25uL的被檢血清。輕輕震勻后于37℃溫育60分鐘。
2.甩掉包被板孔中的液體,每孔加入約300μL洗滌液1×,洗板4遍,拍干后每孔加入50μL酶標單抗1×,震蕩混勻, 37℃溫育30分鐘。
3.甩掉包被板孔中的液體,每孔加入約300μL洗滌液,洗板4遍,拍干,加入TMB底物,50uL/孔。37℃避光溫育15分鐘。
4.終止讀數:在上述每孔加入50uL終止液后在酶標儀450nm波長處,測定光吸收值。
【結果判定】
1. PPRV陰性血清的平均OD值即ODNC;PPRV陽性血清的平均OD值即ODPC;酶標單抗平均OD值即ODCm;樣品的OD值即ODS 。按照以下方法計算抑制率PI
陽性血清抑制率即 PIPC= [1-ODPC/ODCm)] ×100%
陰性血清抑制率即 PINC= [1-ODNC/ODCm)] ×100%
樣品血清抑制率即 PIS= [1-ODS/ODCm)] ×100%
【判定標準】
1.當PIPC 大于60%,PINC小于40%時試驗成立,否則該次檢測結果無效,否則重新進行試驗。
2.被檢樣品PIS大于50%時,判為小反芻獸疫抗體陽性;被檢樣品PIS≤50%時,判為小反芻獸疫抗體陰性。
【注意事項】
1. 所有試劑使用前恢復至室溫(25℃左右),以免溫度過低影響抗原抗體反應。
2. 實驗前應用溫度計檢查溫箱溫度,溫度過高或過低影響OD值高低。
3. 包被板反應時嚴禁堆疊放置,應該平鋪且板間有空隙,不要離溫箱壁太近。
4. 實驗所用移液器及設備應定期校準。
5. 采集的樣品要新鮮,并且最好不要溶血。血清標本在2~8℃放置不要超過2天,室溫不超過8小時,如需長時間放置應儲存于-20℃。
6. 底物液和終止液對皮膚有刺激性,請帶手套注意個人防護。
【技術支持】 王金良 電話:0543-3403060
僅供獸醫診斷使用
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編輯:熊方方