筑起機體免疫長城

【產品簡介】
        鴨傳染性漿膜炎病是由鴨疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer，RA)引起的鴨、鵝、火雞等多種禽類的一種接觸性細菌性傳染病，目前已成為危害養鴨業最嚴重的細菌性傳染病之一。該病呈全球性流行，主要侵害2-8周齡雛鴨。RA血清型眾多，且各個血清型之間沒有交叉保護，目前全世界共有25個血清型被報道，我國流行的 RA 優勢血清型為1型和2型。
        本試劑盒基于免疫原性良好的RA血清2型f34株為包被抗原，采用酶聯免疫吸附試驗檢測鴨血清中2型RAf34抗體IgG，用于免疫疫苗后抗體動態水平監測，指導免疫預防工作，評估鴨場免疫狀況，也可用于傳染性漿膜炎血清學調查。
【產品內容】

試劑盒主要成分	數 量
包被板	96T×2
陽性對照	1ml×1
陰性對照	1ml×1
酶標結合物	20ml×1
樣品稀釋液	50ml×1
底物液	20ml×1
終止液	20ml×1
20×濃縮洗滌液	50ml×1
封口膠	2份
使用說明書	1份

【成分性狀】

包被板	96孔塑制微孔板，無色透明，干燥，無雜質吸附
酶標結合物	略帶黃色澄明液體
陰、陽性對照	略帶黃色澄明液體
樣品稀釋液	略帶黃色澄明液體
濃縮洗滌液	無色或略帶黃色的澄明液體
底物液	無色或微藍色澄明液體
終止液	無色澄明液體，低溫條件下可能會出現絮狀沉淀

【用法與判定】 按以下步驟進行：
1、需要自備的器材
1.1 微量移液器；
1.2 微量移液器配套使用的槍頭；
1.3 用來稀釋洗滌液的500ml量筒；
1.4 適用于檢測96T微孔板的酶標儀；
1.5 用于稀釋樣品的1.5ml Ep管；
1.6 蒸餾水或去離子水。
2、樣品的制備 
用樣品稀釋液將待檢血清樣品進行100倍稀釋(建議：2μl血清樣品加入198μl樣品稀釋液中)，然后再倍比稀釋，樣品加入包被板前要充分混勻，稀釋不同待檢樣品注意更換槍頭。注意：①制備血清用的血液樣本應無溶血現象發生；②不能稀釋陰性、陽性對照。
3、操作步驟 （﹡使用前應輕輕旋轉或震蕩予以混勻，所有試劑應恢復至室溫）
3.1  在A1和A2孔中分別加入100μl陰性對照；
3.2  在A3和A4孔中分別加入100μl陽性對照；
3.3  取100μl經1：100稀釋好的待檢樣品加入相應孔中，并做好記錄；
3.4  37℃孵育30min；
3.5  將各孔的液體棄入廢液桶，每孔加250μl的洗滌液（試劑盒內20×濃縮洗滌液需用蒸餾水或去離子水稀釋后方可使用。如有結晶，需先溶解后，方可進行稀釋）進行洗板，重復5次，每次30s；
﹡加液時防止各孔間洗滌液串流影響檢測結果，盡量將孔內洗滌液拋甩干凈；
3.6  每孔加100μl酶標結合物；
3.7  37℃孵育30min；重復步驟3.5；
3.8  每孔加100μl底物液；
3.9  37℃孵育15min（避光顯色）；
3.10  每孔加50μl的終止液；
3.11  立刻于450nm波長處測定各孔的吸光度值，即OD₄₅₀值。
4、結果判定
4.1陰性對照：正常情況下，陰性對照OD₄₅₀值≤0.2；
4.2陽性對照：正常情況下，陽性對照OD₄₅₀值≥0.5；
4.3臨界值(C.O.)的計算：臨界值=0.12+陰性對照均值；陰性對照OD₄₅₀值大于0.2時應舍棄，如所有陰性對照OD₄₅₀值都大于0.2時須重復實驗；陰性對照于0.05時以0.05計算。
4.4結果判定：檢測樣品OD₄₅₀值≥臨界值，判定該檢測樣品為陽性；檢測樣品OD₄₅₀值＜臨界值，判定該檢測樣品為陰性。
【注意事項】
（1）待檢血清樣品數量過多時，應先使用血清稀釋板將所有待檢血清稀釋完畢后，再統一將血清樣品加入酶標板中，使反應時間一致。
（2）底物液和終止液對皮膚有刺激性，注意防護。
（3）底物液不要暴露于強光和任何氧化劑；使用潔凈的玻璃和朔料容器處理底物液。
（4）所有試劑應在2～8℃存放；使用前恢復到室溫，使用后放回2～8℃。
（5）注意防止試劑盒組分受到污染。
（6）不要使用超過有效期的試劑，不同批次試劑盒的組分不要混用。
（7）操作過程中的移液、時間和洗滌必須精確。
【規格與包裝】96T×2
【貯藏與有效期】2～8℃避光保存，有效期為6個月。